分光光度計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源，光線透過測試的樣品后，部分光線被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。測量范圍一般包括波長范圍為380~780 nm的可見光區(qū)和波長范圍為200～380 nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其*的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。那么使用分光光度計過程中要注意哪些問題呢? 分光光度計的使用要點：
1.堅持標(biāo)準溶液現(xiàn)用現(xiàn)配，不使用過期標(biāo)準液。使用儀器之前，一般要校正儀器，看看空白時透光率是否是100%。
2.比色皿應(yīng)該保持清潔，干燥。如有污物，可用稀鹽酸清洗后，再用1：1的酒精與乙醚清洗涼干。禁止用硬物碰或擦透明表面?；蛘呓ㄗh使用10%的鹽酸溶液浸泡，然后用無水乙醇沖洗2~3次。比色皿具有方向性，使用時要注意，仔細觀察比色皿上方應(yīng)該有一個箭頭標(biāo)志的，代表入射光方向。注入和倒出溶液時，應(yīng)該選擇非透光面。好使用配對的比色皿。
3.防止儀器振動，影響光學(xué)系統(tǒng)。
4.在開機狀態(tài)，不測量時，應(yīng)該打開樣品池門，否則，影響光電傳感器壽命。
5.樣品集中測量，避免開機次數(shù)，可延長光源壽命。
6.儀器工作穩(wěn)定性差，漂移大時，應(yīng)該考慮更換光源或光電元件。
7.一般分光儀主要有光源部分、光路部分、檢測器三的部分，光路有的情況是穩(wěn)壓電源問題，鎢燈問題及鎢燈位置與光路不一致等問題。光路部分主要有比色皿不干凈，燈光與比色皿位置不合適(在正常情況下，比色皿位置放一張白紙，可以清楚看到光斑形狀呈顯矩形，屬于正常情況。對于檢測器大多數(shù)是正常的，但是光敏管或者光電管有時侯也會出現(xiàn)問題。
8.若峰出現(xiàn)很多“毛刺”，可能是掃描速度過快，濃度過高或者狹縫過小;
9.紫外分光光度計用來測紫外光時，石英皿用來調(diào)零時不穩(wěn)定，是由那些原因?首先確定是否用成玻璃比色皿，判斷方法在紫外區(qū)任一波長下用空氣調(diào)零測比色皿的吸光度如果超過1ABS則比色皿用錯。再次用空氣調(diào)零看零點是否穩(wěn)定，如不穩(wěn)則是儀器問題，如空氣穩(wěn)定而放入石英皿后不穩(wěn)定，則檢查是否空白溶液吸光度太高，是否空白溶液藥品過期，或者空白溶液透明范圍不適合此波長測量比如甲醇在210NM以下吸光度很大無法調(diào)零。
10.儀器狹縫寬度的選擇狹縫的寬度會直接影響到測定的靈敏度和校準曲線的線性范圍。狹縫寬度過大時，入射光的單色光降低，校準曲線偏離比耳定律，靈敏度降低;狹縫寬度過窄時，光強變?nèi)酰瑒荼匾岣邇x器的增益，隨之而來的是儀器噪聲增大，于測量不利。選擇狹縫寬度的方法是：測量吸光度隨狹縫寬度的變化。狹縫的寬度在一個范圍內(nèi)，吸光度是不變的，當(dāng)狹縫寬度大到某一程度時，吸光度開始減小。因此，在不減小吸光度時的大狹縫寬度，即是所欲選取的合適的狹縫寬度。
11.紫外測量吸光度值不準
(1).儀器調(diào)零后跳動大的話那可能是儀器有問題。
(2).調(diào)零穩(wěn)定的話，看樣品濃度是否過高，好控制在0-1個吸光度之間。
(3).濃度合適的話，看是否比色皿沒擦干凈，一般可用蒸餾水沖洗一下，擦干后用鏡頭紙擦干凈。
(4).檢查樣品是否穩(wěn)定，如果零點不變而放上樣品變化，那么是樣品有變化，檢查樣品是否有問題。
12.關(guān)于儀器維護：
(1).儀器工作電源一般為220V，允許10%的電壓波動。
(2).為了延長光源使用壽命，在不使時不要開光源燈。
(3).單色器是儀器的核心部分，裝在密封盒內(nèi)不能拆開，為防止色散元件受潮發(fā)霉，必須經(jīng)常更換蛋色器盒干燥劑。
(4).必須正確使用吸收池，保護吸收池光學(xué)面。
(5).光電轉(zhuǎn)換元件不能長時間暴光，應(yīng)避免強光照射或受潮積塵。
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