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液相色譜儀的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相) 內(nèi), 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù), 在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí), 經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過(guò)程, 各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別, 被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出, 通過(guò)檢測(cè)器時(shí), 樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。
液相色譜儀的基本工作原理
高壓泵從溶液貯器中抽走流動(dòng)相,流經(jīng)整個(gè)儀器系統(tǒng),形成密閉的液體流路。樣品通過(guò)進(jìn)樣系統(tǒng)注入色譜分離柱,在柱內(nèi)進(jìn)行分離。柱流出液進(jìn)入檢測(cè)器,使已被分離的組分逐一被檢測(cè)器收集,并將響應(yīng)值轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)后經(jīng)放大被數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜峰,通過(guò)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)對(duì)記錄的峰值進(jìn)行存儲(chǔ)和計(jì)算。
液相色譜儀是依靠色譜柱進(jìn)行分離的。研究證明:物質(zhì)的色譜過(guò)程是指物質(zhì)分子在相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩相(液相和固相)中分配“平衡”的過(guò)程。液相色譜是以具有吸附性質(zhì)的硅膠顆粒為固定相,各種洗脫液為流動(dòng)相。當(dāng)液體樣品在載體流動(dòng)相的推動(dòng)下,在液-固兩相間作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí),由于各組分在兩相中的分配系數(shù)(K)不同,則使各自的移動(dòng)速度不同,即產(chǎn)生差速遷移。各組分在兩相間經(jīng)過(guò)多次分配,從而達(dá)到使混合物分離的目的。
上式反映了物質(zhì)在兩相中進(jìn)行吸附、解吸、再吸附、再解吸…過(guò)程中,由于在兩相中濃度的不同,而存在分配系數(shù)上的差異。
既然分配系數(shù)及其差異是引起組分在液相色譜柱分離的根本原因,那么,必然地也會(huì)同色譜理論中可測(cè)宏觀量之間存在著某種定量關(guān)系,事實(shí)上,色譜理論中通常用容量因子k’的概念來(lái)反映物質(zhì)在兩相中的分配關(guān)系k’值可以非常方便地表達(dá)組分在兩相的分配,又很容易從色譜實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中直接測(cè)得,是色譜理論中重要的基本參數(shù)之一